PCR diagnostyka - analiza na zakażenie

Łańcuchowa reakcja polimerazy (PCR), - dokładność diagnostyki molekularnej genetycznej, która umożliwia osobie identyfikacji różnych infekcji i chorób dziedzicznych, zarówno ostre, jak i przewlekłe etapy i na długo przed choroba może objawiać się.

reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) w 1983 roku opracowała Myullis Cary (USA), na który w 1993 roku otrzymał Nagrodę Nobla w dziedzinie chemii.

PCR dla większości zakażeń stać się rodzajem „złoty standard”. Większość specjalistów do czynienia z nim prawie codziennie i nie są bez ostatecznej diagnozy. PCR jest często jedyną reakcją na wykrycie aktywnych stadiach choroby w momentach, gdy inne zawodzą bakteriologiczne, wirusologiczne i immunologiczne metod diagnostycznych.

Zalety diagnostyki PCR w nowoczesnej medycynie:

• bezpośrednie wykrywania obecności patogenów (czyli konkretnego fragmentu DNA lub RNA patogenu) w próbce.
• Wysoka specyficzność pozwala zdefiniować unikalny odcinek DNA lub RNA charakterystyczne dla konkretnego patogenu, co eliminuje możliwość fałszywych alarmów.
• Wysoka czułość metody PCR można wykryć nawet pojedyncze komórki patogenów (wirusy, bakterie). Czułość PCR 10-1000 w komorze próbki (na przykład wrażliwość testów immunologicznych i mikroskopowych - tylko 103-105 komórek).
• Rozwój technik Uniwersalny PCR do wykrywania różnych patogenów. Przedmiotem badania dla PCR materiał genetyczny (DNA, RNA) patogenu. Metoda ta pozwala na identyfikację kilku patogenów z próbki biologicznej.
• Wyniki analizy produkują wystarczająco szybko. Pełne badanie jest przeprowadzane przez 4-4,5 godziny, co najmniej - trochę dłużej.
• Zdolność do wykrywania patogenów objawów chorobowych (przedkliniczne Diagnostics), a następnie transmitowane choroby (rozpoznanie retrospektywne). Przykładem przedklinicznych diagnozy zostaną zbadane w okresie inkubacji (od momentu zakażenia do pojawienia się dolegliwości pacjenta), jak i utajonego zakażenia (gdy brak objawów w ogóle, ale tylko dane laboratorium - PCR, na przykład). Jednym z najważniejszych PCR diagnostyki jest przeprowadzenie PCR w materiale archiwalnym lub pozostałości biologicznych, co jest ważne dla identyfikacji lub ojcostwa.

Obecnie diagnoza PCR ulega znaczący rozwój. Ciągłego doskonalenia sposobu, czasu i znowu są nowe odmiany PCR, rynek medyczny otrzyma nowy system testowy dla tej reakcji. Zatem koszt analizy jest coraz bardziej dostępne dla szerokiego grona pacjentów rocznie.

Co jest podstawą metody PCR

Podstawą dla reakcji łańcuchowej polimerazy powtarza się dwukrotnie (amplifikacji) o pewnej części DNA lub RNA za pomocą enzymów in vitro. Wynikiem jest ilość DNA lub RNA, wystarczającą do analizy wizualnej. Badanie jest kopiowany tylko fragment, który pasuje do podanych warunków, i tylko w sytuacji jego obecności w badanej próbce.

Na przykład, materiał do badań podejrzewanej o zawieranie fragmentów DNA lub RNA, patogenu (ślina, krew, mocz, narządów odpływ) są umieszczone w specjalnym reaktorze (termocyklerze). Następnie dodano dalsze specyficzne enzymy, które wiążą się z patogenu DNA lub RNA i syntezę jego kopii. Chodzi w kilku etapach rodzaju „reakcja łańcuchowa”, a na końcu jednej kopii materiału genetycznego mogą być utworzone i setki tysięcy kopii. Potem przychodzi analizę i porównanie wyników z dostępnej bazy danych na temat struktury różnych patogenów. Przez PCR możliwe jest nie tylko do określenia rodzaju patogenu, ale także dać wynik ilościową analizę, która jest, jak wiele patogenów w organizmie człowieka.

PCR jest obecnie rozszerza krąg możliwości badawczych we wprowadzeniu mutacji, składanie fragmentów DNA, i szeroko stosowane w medycynie, na przykład, w celu ustalenia ojcostwa, pojawienie się nowych genów i tak dalej.

Co infekcja może być wykryte przez diagnostykę PCR

1) zakażenie HIV (można wykryć ludzkiego wirusa upośledzenia odporności HIV-1)
2) wirusowe zapalenie wątroby typu A, B, C, G (RNA HAV, HBV DNA, RNA HCV RNA, HGV)
3) mononukleoza zakaźna (wirusem Epsteina-Barr -VEB DNA)
4), wirus cytomegalii (CMV DNA)
5) zakażenie wirusem opryszczki (Herpes simplex virus DNA HSV typu 1 i 2)
6) (STI chorób przenoszonych drogą płciową przez) - ureaplasmosis bakteryjne zapalenie pochwy, zakażenie chlamydią, mykoplazmoza, rzęsistkowica,
7) gruźlicy (Mycobacterium tuberculosis)
8) wirusów onkogennych - zakażenie wirusem brodawczaka (wirus brodawczaka ludzkiego (w tym jego onkogenne typy 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, i 59)
9) Boreliosis, kleszczowego zapalenia mózgu
10) Listerioza
11) Candida (grzyby z rodzaju Candida)
12) zakażenie Helicobacter (H. pylori)
i inne

Biorąc pod uwagę zakres patogenów, diagnostyki PCR jest powszechnie stosowane w praktyce ginekologicznej, prostaty, praktyce, choroby zakaźne, pulmonologii, TB, gastroenterologii, hematologii, onkologii i innych.

Materiał do badań oraz zasad jego ogrodzeniu

Materiałem do analizy PCR, co może identyfikować obcego DNA z bakterii lub wirusa DNA lub RNA, mogą służyć inne środowisko biologiczne i płyny człowieka: śluzu, mocz, krew, plwociny, zgarniania nabłonkowych komórek, tkanek, łożysko, krew, sok prostaty, płyn owodniowy, wysięk opłucnowy.

Podczas badań przesiewowych w kierunku chorób przenoszonych drogą płciową (STI) u mężczyzn i kobiet są pobierane z narządów płciowych, wymazu lub zeskrobać z wymazu szyjki macicy lub zeskrobać z cewki moczowej (cewka moczowa), mocz.

Podczas kontroli zakażenia (zakażenie opryszczką, infekcji CMV, mononukleoza, toksoplazmoza, zapalenie wątroby typu B i C, HIV) PCR wycofania krwi.

Do diagnozowania mononukleozy zakaźnej, zakażenia wirusem cytomegalii, opryszczki infekcja gardła wymaz jest pobierane do badań przesiewowych dla CMV - moczem. Często do badania na uszkodzenia systemu nerwowego w szeregu badań wykonanych płynu mózgowo-rdzeniowego.

W materiale pulmonologii jest plwocina, płyn opłucnowy.

Podczas skriningu na infekcje płodu - płyn owodniowy, tkanek łożyska.

Przygotowanie do dostarczania materiału i prowadzenie diagnostyki PCR

Prawie wszyscy pacjenci poddawani diagnostykę PCR, mogą liczyć na rzetelnych, dokładnych i szybkich wyników, co zależy w dużej mierze od możliwości laboratorium, profesjonalnych lekarzy laboratoryjnych. W tym samym czasie, wielu nie zdaje sobie sprawy, że najbardziej niezawodny w dużej mierze zależy od nas samych, a mianowicie na zaleceniami lekarza prowadzącego, styl życia, i poprawności materiału ogrodzenia. Gdy materiał ogrodzenia wymagane warunki bez brudu (zanieczyszczenia) materiału, a tym samym w wątpliwość obiektywny analizy.

Właściwego przygotowania do dostarczania materiału, nie stwarza żadnych trudności. Zalecenia następujących lekarzy dla pacjentów:

1) nie mieć stosunek płciowy w dniu poprzedzającym datę materiala-
2) krew do badań zajmował się rano na czczo (nie jeść, nie pić) -
3) W czasie pierwszego dnia mocz będzie część do czystego sterylnym pojemniku.

gotowość daty PCR

Wynik końcowy jest gotowa na 1,5-2 dni po dostarczeniu materiału. W niektórych przypadkach, wynik jest gotowy do pierwszego dnia.

Rozszyfrowanie wyników PCR

ujemny wynik PCR wskazuje, że badany materiał w momencie dostawy nie znaleźliśmy żadnych śladów czynników zakaźnych. Większość przypadków pokazuje brak infekcji, która stara się odnaleźć w badanej próbce.

pozytywny wynik PCR wskazuje na wykrycie śladów infekcji w próbce biologicznej testu. Z wielką precyzją dodatni wynik wskazuje na obecność zakażenia w danym czasie.

Istnieją sytuacje, gdy PCR jest pozytywny, ale aktywnej infekcji nie można mówić - tak zwanym „zdrowym nosicielem” bez objawów klinicznych choroby, które nie wymagają leczenia, ale wymaga dynamicznego monitorowania przez lekarza. Występuje częściej u wielu infekcji wirusowych (HPV, CMV, zakażenie EBV, zakażenie herpes, i inni) w materiałach takich jak ślina, skrobiąc szyjki macicy, cewki moczowej, czyli z lokalnego centrum uwagi. Jednakże, należy pamiętać, że przeniesienia zakażenia z nośnikami zdrowych ludzi może, jako przejście do postaci przewlekłej choroby z procesu aktywacji. Jeśli PCR jest dodatnia we krwi, to żaden przewoźnik i wymaga szczególnego traktowania.

Ilościowy PCR jest oceniany przez lekarza indywidualnie dla danego zakażenia oddzielnie i nie ma wspólnych gradacji. Na podstawie wyniku ilościowego PCR lekarz może określić poziom aktywności infekcji i narażać stadium choroby, co z pewnością wpływa na przebieg i dawki przepisane leki.

Jednym z ostatnich niepokojących kwestii: jak dokładne diagnozy PCR?

3 istnieje definicja analizy PCR:

1. Dokładność (z dużym prawdopodobieństwem może zidentyfikować lub brak zakażenia).
2. specyficzność (dokładność wykrywania określonego zakażeniu).
3. Czułość (nawet przy niskim poziomie patogenów materiału genetycznego w próbce stwierdza infekcji).

reakcja łańcuchowa polimerazy jest prawie nie daje wyników fałszywie dodatnich (czyli nie ma pozytywne próbki, gdzie zakażenie jest nieobecny). Fałszywie ujemne wyniki są rzadko (najczęściej jest to spowodowane brakiem aktywnego zakażenia u ludzi w tej chwili). Na przykład, latentnego zakażenia, przewlekłe zakażenie jest aktywny.